說說色譜分離柱再生的兩種方法
點擊次數(shù)：4220 更新時間：2019-10-29
色譜分離柱長時間使用后，造成柱入口樹脂損失，使死體積增大，分離度降低；長時間未使用的色譜分離柱樹脂床進(jìn)入空氣會使樹脂產(chǎn)生溝流，造成分離度降低，同時造成離子色譜峰分叉。這些現(xiàn)象均造成定量結(jié)果的誤差。因此，離子色譜峰形一旦有變化，就要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
色譜分離柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán)，這些帶電基團(tuán)通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。
色譜分離柱是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法，其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合，這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的，在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時，離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同，其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同，從而被分離出來。
色譜分離柱的再生方法有兩種：
?。?）先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類，再用25ml甲醇沖洗，以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì)，再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類，后用緩沖液平衡。
?。?）先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌，然后用水洗滌（不要用堿性溶液，以防硅膠基質(zhì)溶解），后用緩沖液平衡。
